Методы определения физиологических антикоагулянтов

Методы определения физиологических антикоагулянтов

Протеин С

Для определения протеина С разработано несколько методов: иммунохимический метод, метод с хромогенным субстратом и коагуляционный. Протеин С только в комплексе с протеином S инактивирует Vа и VIII, поэтому желательно параллельно исследовать и протеин С и протеин S.

Определение протеина С с использованием хромогенного субстрата. Этот метод прост, специфичен, легко автоматизируется. Так как протеин С – витамин-К-зависимый гликопротеин, то при лечении непрямыми антикоагулянтами (антагонистами витамина К) появляются формы протеина С, которые не обладают антикоагулянтной активностью, но определяются методами с хромогенными субстратами (так называемые PIVKA-формы). Поэтому у больных, принимающих непрямые антикоагулянты, могут быть завышенными результаты определения протеина С хромогенными методами.

Определение протеина С коагуляционным методом. Метод легко автоматизируется. Коагуляционный метод оценивает активность протеина С, фиксирующегося карбоксилированной частью на фосфолипидах. РIVKA -формы не функционируют в этой системе, и тест не дает ложных результатов у пациентов, принимающих непрямые антикоагулянты или имеющих дефицит витамина К.
Исказить результаты теста могут такие факторы, как наличие мутации фактора V Лейден, присутствие в плазме волчаночного антикоагулянта, терапия гепарином. Для получения достоверных результатов очень важно качество используемой протеин-С-дефицитной плазмы.
У некоторых пациентов, принимающих непрямые антикоагулянты, выявляются чрезвычайно низкие цифры содержания протеина С. Эти результаты могут быть связаны не только с истинным дефицитом протеина С, но и с развитием резистентности фактора Vа к активированному протеину С (АПС).

Определение протеина С иммунохимическим методом. Иммунохимическое определение протеина С применяется реже, чем функциональные методы. Это объясняется тем, что данный способ выявляет только классическое снижение концентрации протеина С и не определяет его функциональную неполноценность.
В некоторых случаях при лечении больных с дефицитом протеина С непрямыми антикоагулянтами у них могут возникнуть  некрозы кожи в результате рикошетных тромбозов. Если антикоагулянты назначаются в высокой дозе без поддержки гепарином, то возникает состояние, при котором протеин С  очень быстро снижается (в норме время его полужизни в системе циркуляции 4-6 ч). В то же время витамин-К-зависимые факторы свертывания, в том числе протромбин, остаются еще в пределах нормы (у них период полужизни 16-20 ч). Эта ситуация может усугубляться тем, что непрямые антикоагулянты начинают назначать в случае развития тромбозов или угрожающей ситуации  по тромбообразованию, когда система прокоагулянтов активирована. Быстрое снижение протеина С провоцирует в этом случае массивное тромбообразование, проявляющееся вплоть до некрозов кожи. Активность протеина С следует определять до начала лечения антикоагулянтами непрямого действия и контролировать во время лечения.

Референсные значения протеина С: 94-124%

ПОВЫШЕНИЕ протеина С
отмечается во время беременности.

СНИЖЕНИЕ протеина С:

• врожденный (наследственный) дефицит или аномалии протеина С;
• геморрагическая болезнь новорожденных;
• заболевания печени с нарушением ее функции;
• ДВС-синдром;
• нефротический синдром;
• синдром острой дыхательной недостаточности;
• менингококковый сепсис;
• гемодиализ;
• лечении L-аспарагиназой;
• лечении пероральными (непрямыми) антикоагулянтами (дефицит витамина К);
• послеродовый и послеоперационный период.

Протеин S

Протеин S – витамин-К-зависимый белок, который является кофактором активированного протеина С. Это функция положена в основу всех известных коммерческих тест-систем определения протеина S. Описаны случаи как функционального, так и количественного дефицита протеина S. При проведении тестов важно помнить, что протеин S присутствует в плазме частично в свободном состоянии, частично в комплексе с С4-связывающим протеином (С4-СП), но активна  только свободная форма протеина S.

Определение протеина S коагуляционным методом. Для определения протеина S необходимо использовать тест-систему, содержащую очищенный активный протеин С, его субстрат – фактор Vа и дефицитную по протеину S плазму. Специфичность метода относительная, так как фактор V Лейден, высокий уровень ф.VIII и волчаночный антикоагулянт могут существенно влиять на результаты теста, а именно: с этими факторами часто проводят дифференциальную диагностику, определяя протеин S. 
Так как коагуляционный метод подвержен действию многих интерферирующих факторов и не стандартизирован, то предпочитают использовать иммунохимический метод.

Определение протеина S иммунохимическим методом. Иммунохимический метод достаточно широко распространен. Наборы последних разработок позволяют определять «свободный протеин S» прямо без предварительной обработки. Недостатком иммунохимического метода является то, что он выявляет протеолитически  неактивные формы протеина S, которые иногда появляются в плазме.

Референсные значения протеина S: 81-111%

УМЕНЬШЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ (активности) протеина S:

• врожденный (наследственный) дефицит;
• врожденное (наследственное) уменьшение свободной фракции протеина S;
• заболевания печени с нарушением ее функции;
• ДВС-синдром;
• нефротический синдром;
• системная красная волчанка;
• лечение L-аспарагиназой;
• лечение пероральными (непрямыми) антикоагулянтами;
• прием эстрогенов (пероральных контрацептивов);
• беременность, послеродовый период;
• наличие аутоантител к протеину S.

Антитромбин III

Для определения активности антитромбина III (АТ) чаще всего используют метод с хромогенным субстратом. Антитромбин расщепляет субстрат, в результате чего образуется окрашенный продукт, количество которого зависит от исходной активности антитромбина III.  Существуют также иммунохимические (турбидиметрия, нефелометрия) и коагуляционные методы.
Тест может применяться для мониторинга лечения гепарином. Длительная гепаринотерапия может приводить к снижению активности АТ в плазме. Лечение высокими дозами гепарина, особенно нефракционированным гепарином, приводит к транзиторному снижению АТ по механизму потребления, особенно у больных с тяжелой патологией, при критических состояниях, при ДВС-синдроме, сепсисе, злокачественных опухолях.
У новорожденных уровень АТ составляет около 50 % и достигает уровня взрослых к 6 мес. Небольшое снижение АТ наблюдается в середине менструального цикла, в пред- и послеродовом периоде, при токсикозах второй половины беременности, в послеоперационном периоде. Эти сдвиги более выражены у пациентов с группой крови А (II), а также у пожилых.

Референсные значения АТ: 86 - 116%

СНИЖЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ (активности) АТ:

• врожденный (наследственный) дефицит или аномалии АТ (снижение активности или чувствительности к гепарину);
• заболевания печени (опухоли, цирроз, алкогольный гепатит);
• нефротический синдром (протеинурия свыше 5 г/л);
• карцинома легких;
• ДВС-синдром;
• множественные травмы, тяжелые роды, поздние гестозы;
• прием эстрогенов (пероральных контрацептивов), кортикостероидов;
• лечение L-аспарагиназой.

УВЕЛИЧЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ (активности) АТ:

• во время менструации;
• острый вирусный гепатит, холестаз;
• прием анаболических стероидов;
• лечение пероральными (непрямыми) антикоагулянтами.

Новый комментарий